O. Brandt1, E. Rossmann2,3 and R. Wallich3

1.INTAVIS Bioanalytical Instruments AG, Nattermannallee 1, 50829 Köln, Germany

2.Genzyme Virotech GmbH, Löwenplatz 5, 65428 Rüsselsheim, Germany

3.University of Heidelberg, Institute for Immunology, Im Neuenheimer Feld 305, 69120 Heidelberg, Germany

   引言    

多肽芯片是一种强大的工具，可用于抗体定性，检测酶的特定序列（例如激酶）或者寻找目标多肽序列的反应伴侣。此前有一种在纤维素膜上合成含有几百个多肽的阵列的方法很流行。从15年前SPOT斑点阵列发明以来，已经在许多应用中得到实践[1]。这种方法需要用的到试剂体积较大，同时一般仅有1个多肽库的拷贝。本文所展现的新方法采用载玻片作为支撑物，克服了这些的限制[2,3]。多肽在一种修饰过的纤维素上进行合成，然后溶解后通过点样制备芯片。这种方法可以批量制备相同的多肽芯片，而所需的样品体积可以低至150μl甚至更少。我们使用一个实例展示了使用人血清对多种包柔氏螺旋体菌抗体的表位定位并适用一个底物库检测激酶特异性。芯片可以适用于放射自显影法，化学发光法和酶显色法等不需要昂贵仪器的检测方法。

   血清筛选    

完整的抗体重叠多肽-纤维素复合物被点样到涂层玻片上，形成一种三维空间结构，超过传统单层结构一百倍效果。多肽芯片和血清孵育杂交后，可以使用例如酶显色或者化学发光法等不需要昂贵仪器的方法检测结果。

使用INTAVIS CelluSpots™多肽芯片筛选血清样品。孵育并显色后，通过计算机分析并聚类分析扫描结果。

   结果    

将多种包柔氏螺旋体菌抗体生成长度为20mer的重叠肽并点样到惰性涂层玻片上，使用红色印迹包围两组相同的384多肽点阵。使用稀释的人血清杂交后，通过DAB溶液显色。

211种血清和CelluSpots™多肽芯片的杂交结果。采用层序聚类分析血清样品和多肽芯片的杂交结果。

合成激酶底物和文献及数据库中已知的激酶序列并点样到玻片上。制备好的芯片和激酶以及放射性标记的ATP（ATP-gamma 32P）一同孵育。多次清洗并干燥玻片，然后用荧光成像仪和X光片曝光。

   结论    

INTAVIS CelluSpots™多肽芯片是一种灵活的免疫学筛选工具。上百种血清，激酶或者其他样品可以通过多肽库平行检测，操作简单。可制备一定数量的自由定义的多肽库，并且成本较为经济。可以简单的应用到临床检测，疫苗开发或者寻找合适的酶抑制剂。CelluSpots™多肽芯片具有以下优点：所需样品体积小，点阵浓度高，平行检测多种不同的样品以及灵活的检测方法。

   参考文献    

[1] Frank, R. (1992) Tetrahedron, 48, 9217-9232.

[2] Beutling, U. et al. (2005) Kenes International, Geneva, pp.152-153.

[3] Dikmans, A. et al. (2006) QSAR Comb. Sci. 25(11), 1069-1080.

翻译：孙其昌，苏州拜诺生物科技有限公司

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