KOD-201 200 U 200 reactions

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耗材

KOD-201 200 U 200 reactions

适用于：蛋白组学,免疫学,分子生物学,细胞生物学

原产地：日本

描述

KOD以上——基于DNA聚合酶从hyperthermophilic Archaeon Thermococcus kodakaraensis KOD1(1)(2)KOD以上-展览优秀的PCR忠诚和效率高。KOD以上的酶解——包含两种类型的anti-KOD DNA聚合酶抗体抑制聚合酶和3 '→5 '核酸外切酶活性,从而使热启动PCR(3)。KOD以上产生钝端PCR产品,由于3 '→5 '核酸外切酶(校对工作)活动。

特性

KOD以上的PCR误差率——大约是80倍不到Taq DNA聚合酶。
有效的放大GC-rich目标。
Hotstart技术使高效放大。
KOD以上——允许以下放大(最大):21 kbλ噬菌体的DNA,12 kb从人类基因组DNA,和7 kb的互补。

表。每个PCR酶突变频率的比较。

	菌落数		突变频率 (%)
	总	突变体	突变频率 (%)
KOD以上- - -	10610年	10	0.09
高保真PCR酶(公司)	10900年	68年	0.62
空斑形成单位建立DNA聚合酶	6520年	76年	1.17
Taq DNA聚合酶	10560年	780年	7.39

* PCR忠诚是基于PCR的突变频率产品使用积极的选择的基本分析和rpsL基因(4)。

应用程序

高保真PCR

源

大肠杆菌菌株携带克隆KOD DNA聚合酶基因

单位的定义

一个单位被定义为酶的数量将10 nmol核苷酸合并到一个酸不溶性物质在30分钟75ºC。

储存条件

50 mM Tris-HCl(pH8.0),0.1毫米EDTA,1毫米德勤,渐变20 0.001%,0.001%诺乃清洁剂p 40,50%甘油存储在-20ºC

组件

这200反应试剂包括以下组件:

KOD以上(1.0 u /µl)*	200年µl×1
KOD以上- 10×缓冲区	1.0µl×1
25毫米MgSO4	1.0µl×1
2毫米核苷酸	1.0µl×1

*酶解决方案包含anti-KOD DNA聚合酶抗体中和聚合酶和3 '→5 '核酸外切酶活性。

典型的PCR反应的设置

组件	体积	最终浓度
KOD以上- 10 x缓冲区	5µl	1×
2毫米核苷酸*	5µl	0.2µM
25毫米MgSO4	2µl	1.0毫米
10 pmol /µl底漆# 1	1.5µl	0.3µM
10 pmol /µl底漆# 2	1.5µl	0.3µM
DNA模板	Xµl		基因组DNA 10 ~ 200 ng / 50µl 质粒DNA 1 ~ 50 ng / 50µl 互补脱氧核糖核酸~ 100 ng(RNA枚。)/ 50µl
PCR级水	Yµl
KOD-Plus -(1.0 U /µl)	1µl	1.0 U / 50µl
反应总额	50µl

*不使用来自其他工具或公司的核苷酸。

PCR循环条件

应用程序数据

例1。放大的GC-rich目标
GC丰富目标,脂肪酶基因(假单胞菌sp)(GC含量= 70%),是使用各种PCR酶放大。KOD以上——可能放大目标基因没有添加剂如DMSO和PCR增强剂。
1:KOD以上- 2:Taq DNA聚合酶 3:Taq DNA聚合酶+ 5% DMSO溶液 4:Taq DNA聚合酶+ PCR ehnancer(公司) 5:高效Taq DNA聚合酶(B公司) M:200个基点梯子标记	目标:(假单胞菌脂肪酶基因sp)。(GC = 70%) 反应条件:看到典型的反应设置示例:质克隆10 ng / 50μl反应循环条件:
例2。放大的长期目标
长期目标的大小从0.6 - 3.6 kb不等使用高保真放大PCR酶。所有的目标都可以放大KOD以上-。
1:人类β-globin 0.6 kb 2:人类β-globin 1.3 kb 3:人类β-globin 2.8 kb 4:人类β-globin 3.6 kb